ردیابی سریع Armillaria mellea عامل پوسیدگی ریشه و طوقه درختان از نمونه های خاک و چوب با استفاده از تکنیک PCR آشیانه ای

بیماری پوسیدگی آرمیلاریایی ریشه و طوقه که توسط گونه­های Armillaria ایجاد می­شود، یکی از بیماری­های مهم گیاهان چوبی اعم از درختان میوه، جنگلی و زینتی در مناطق مختلف می­باشد. این بیماری در استان اصفهان به شدت شیوع دارد و همه ساله خسارت فراوانی را به درختان میوه وارد می­سازد. از آنجا که در میان درختان میوه تعداد کمی رقم مقاوم به بیماری یافت می­شود و هیچ اقدام موثری نیز در کنترل کامل بیماری وجود ندارد، ردیابی عامل بیماری در خاک جهت پایه­ریزی یک طرح مدیریتی و کاهش خسارت بیماری حائز اهمیت است. در این تحقیق جهت ردیابی سریع، حساس و اختصاصی جدایه­هایArmillaria  از نمونه­های خاک و چوب، از آغازگرهای اختصاصی AR1 و AR2 با موفقیت استفاده شد. استخراج DNA به طور مستقیم از نمونه­های خاک و چوب انجام گرفت و ناحیه ITS در مرحله اول به وسیله آغازگرهای عمومی ITS1 و ITS4 در واکنش PCR و در مرحله دوم توسط آغازگرهای اختصاصی AR1 و AR2 در واکنش nested PCR تکثیر شد. با استفاده از روش nested PCR، ردیابی بیمارگر به طور مستقیم در نمونه­های خاک و ریشه بدون نیاز به جداسازی و کشت میسلیوم آرمیلاریا و در مراحل اولیه بیماری امکان­پذیر می­باشد.